Kloning Gen

Gambar vektor yang digunakan

Pertama-tama yang dilakukan dalam proses ini  adalah melakukan proses PCR pada bakteri Streptococcus pyogenes untuk diambil gen lmb nya. Setelah di PCR dan di dapat gen lmb nya lanjut ke proses penyisipan fragmen DNA yaitu gen lmb pada plasmid.

Jadi gen lmb di sisipkan pada plasmid vector itu terjadi karena bantuan dari enzim insert,enzim restriksi  nya yaitu ecoR1 lalu gen lmb tersebut masuk pada plasmid vector disitulah terjadi rekombinan plasmid, campurkan inang e.coli dengan plasmid dengan ditambahkan CaCl2  dan di lakukannya tranformasi dengan cara heat pulse dengan menggunakannya heat shock  ini dilakukan untuk dinding e.coli menjadi permeable agar DNA dapat masuk ke sitoplasma lalu kultur menggunakan natrium agar memakai ampisilin lalu setelah itu kita dapat melihat dari cawan petri yang diperoleh mana e.coli yang masih bertahan, pada cawan petri yang lain disimpan juga e.coli sebagai pembanding yang tidak ditambahkan plasmid , tetapi tetap ditetesi ampisilin , dari kedua cawan petri tersebut dapat kita amati dimana e.coli yang masih bertahan yaitu e.coli yg ditambahkan dengan plasmid vector. Setelah itu plasmid yang bertahan di replikasi , proses replikasi terjadi yang diawali dengan pembukaan heliks ganda menjadi single straind, protein pengikat untai tunggal untuk menstabikan DNA yang tidak berikatan, setelah itu dari untai yang satu ke untai yang laiinnya terdapat leading straind yang berfungsi untuk mensintesis DNA yang baru dengan bantuan DNA polymerase, arah untainya adalah dari 5’-3’, pada tahap selanjutnya terbentuk lagging straind yang disintesis secara continue karena replikasinya berlawanan arah atau terputus-putus sehingga akan terbentuk fragmen okazaki, arah untai ini dari 3’-5’. Pada proses replikasi ini menggunakan RNA primer yang berfungsi sebagai tanda dimulainya replikasi, RNA primer (primase)  tersebut diganti dengan DNA yang baru dengan bantuan DNA polymerase, kemudian fragmen okazaki tersebut disempurnakan oleh DNA ligase. DNA ligase ini diseleksi menggunakan metode biru putih dan seperti pada proses replikasi menghasilkan koloni yang sama dengan recombinant plasmid, DNA ligase ini juga menghasilkan sel yang mengandung recombinant plasmid.

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s